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酵母双杂全段不结合,分段却会结合,为什么?

来源:百度知道 编辑:从小磊
有网友碰到过这样的酵母双杂全段不结合,分段却会结合,为什么?,问题详细内容为:举个例子:C8-ADD2-BD不结合;C8-M-ADD2-BD却有结合(质粒没有问题,转化也重复做过)...举个例子:C8-AD D2-BD不结合;C8-M-AD D2-BD却有结合(质粒没有问题,转化也重复做过)展开,我搜你通过互联网收集了相关的一些解决方案,希望对有过相同或者相似问题的网友提供帮助,具体如下:

解决方案1:
酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性。⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反应在核内无法进行。另外有些蛋白的正确折叠和功能有赖于其他非酵母蛋白的辅助, 这限制了某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋白等的研究。⑵酵母双杂交系统的一个重要的问题是假阳性。由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用, 使DNA结合结构域杂交蛋白在无特异激活结构域的情况下可激活转录。另外某些蛋白表面含有对多种蛋白质的低亲和力区域, 能与其他蛋白形成稳定的复合物, 从而引起报告基因的表达, 产生假阳性结果。
许多研究者对双杂交系统进行了改进和发展,。例如采用假阳性显示分析法和双筛选系统以减少假阳性的发生;发展哺乳动物双杂交系统更好地研究蛋白间的相互作用。其中双筛选系统用二种不同的报告基因(常用lacZ和HIS3)有以下优势vii:⑴ 用不同的启动子表达位于酵母二个染色体上的报告基因, 可明显减少假阳性。⑵ 通过营养型筛选增强了筛选能力, 尤其适用于对较大的库容量而被选蛋白较少情况下的筛选。
哺乳动物双杂交系统Ⅷ也是一种基因水平上以重建转录因子功能为基础的体内分析方法。在此系统中,一种感兴趣的蛋白与Gal4--DNA结合结构域构成融合蛋白,另一种蛋白与单纯疱疹病毒VP16蛋白的激活结构域以融合蛋白表达。表达这些融合蛋白的载体与一个报道载体(CAT)共同转染哺乳动物细胞系。报道质粒含一个Gal4结合位点下游的cat基因。假如两个融合蛋白相互作用则cat报道基因表达水平明显增高。用此系统证实了P53蛋白与大T抗原的相互作用, 得到了酵母双杂交系统相同的结果。且较酵母双杂交系统更为快速,在转染48h内得到结果。并且在哺乳动物细胞能更好模仿体内的蛋白-蛋白相互作用。因而,哺乳动物双杂交系统可作为酵母双杂交系统的辅助手段。

酵母双杂交法的原理?

答:酵母双杂交法的原理: 典型的真核生物转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。 前者可识别DNA上的特异序列, 并使转录激活结构域定位于所...

鲑鱼精dna在做酵母双杂使用时怎么处理

答:注意事项 (1)酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照,以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例: 阳性对照:pGADT7-T + pGBKT7-53,其中T蛋白和53蛋白是已经明确在酵母细胞内能...

酵母双杂交为什么10mm的培养皿可以正常生长,但是1...

答:我遇到过这样的情况,有可能你用的agar含有微量的营养,因此4缺并不是真正意义上的4缺了,换用bacto agar就可以了还有可能是组氨酸渗透,代谢补偿途径。另外,按说嘌呤是最严格的限制因素,但是我的酵母不加嘌呤勉强还可以活,因为接种上去的培...

酵母双杂 te buffer是什么意思

答:你好 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 。典型的真核生物转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可...

想知道酵母双杂交到底咋回事啊,看了半天书,晕,...

答:听过破镜重圆的故事吧。 假如甲乙两个人各拿半块镜子,只有当他们两人在一起的时候这个镜子才可以拼成一个整个的。 酵母双杂交我没做过,我的理解就是这样的:你看到的BD和AD分别是两个半块的镜子,你想研究的两个蛋白则是甲乙两个拿镜子的人。 ...

酵母双杂交想要验证基因的哪一段互作

答:酵母双杂是检验蛋白质相互作用的常用手段,很管用啊~~而且双杂交乃至三杂交载体研究得越来越成熟。不过,弱相互作用或者一过性相互作用不适用,此外营养筛选假阳性较高

酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有

答:酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的。这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进。其中一个重要改进是引入额外的报道基因,如广泛采...

酵母双杂交筛库不加3-at有什么影响

答:假阳性 非常多,你是 -LWH 3缺+ 3-AT 吗?

酵母双杂交系统有哪些优缺点

答:1、高敏感性。原因: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达; ②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定; ③通过mRNA使信号放大; ④检测的结果是基因...

用Gal4系统做酵母双杂,显色反应用的X-a-Gal能不能...

答:显色反应只能用的X-a-Gal,不能用X-Gal代替。如果你来不及的话,可以用其它方法判定,在产品说明书上一般都有代替方法。


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www.wosoni.com false 互联网 http://www.wosoni.com/b/nnvtrm/ddljhcfllfelflfjklj.html report 3365 解决方案1:酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性。⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反应在核内无法进行。另外有些蛋白的正确折叠和功能有赖于其他非酵母蛋白的辅助, 这限制了某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋白等的研究。⑵酵母双杂交系统的一个重要的问题是假阳性。由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用, 使DNA结合结构域杂交蛋白在无特异

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